碧波蕩漾的意思是什么 怎么理解碧波蕩漾的意思
2023-01-30
逆轉(zhuǎn)錄的原理及主要過程 逆轉(zhuǎn)錄的基本過程
更新時(shí)間：2022-03-10 18:07:17作者：未知
原理：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。過程：在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下以dNTP為底物，RNA為模板，tRNA為引物。
按5′→3′方向，合成一條與RNA模板互補(bǔ)的DNA單鏈。然后它與RNA模板形成RNA DNA雜交體，隨后又在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，水解掉RNA鏈，再以此DNA為模板合成第二條DNA。逆轉(zhuǎn)錄過程是病毒的復(fù)制形式之一，如RNA病毒中的逆轉(zhuǎn)錄病毒，DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花葉病病毒的復(fù)制均需要經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄。
逆轉(zhuǎn)錄過程在真核細(xì)胞中也同樣存在，例如逆轉(zhuǎn)座子和端粒DNA的延長均存在逆轉(zhuǎn)錄過程，需逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。逆轉(zhuǎn)錄過程的揭示是分子生物學(xué)研究中的重大發(fā)現(xiàn)，是對中心法則的重要修正和補(bǔ)充。
人們通過體外模擬該過程，以樣本中提取的mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成出互補(bǔ)的cDNA，構(gòu)建cDNA文庫，并從中篩選特異的目的基因。該方法已成為基因工程技術(shù)中最常用的獲得目的基因的策略之一。