碧波蕩漾的意思是什么 怎么理解碧波蕩漾的意思
2023-01-30
更新時(shí)間:2022-03-11 22:03:28作者:佚名
不同大小的DNA片段,在堿性條件下帶負(fù)電荷,在電流的作用下,由負(fù)極向正極移動(dòng),根據(jù)不同DNA分子片段的大小和形狀不同,其在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速率也不同,于是在相同時(shí)間的情況下,經(jīng)過(guò)紫外照射,就可以看到DNA的位置,從而達(dá)到分離、鑒定的目的。
瓊脂糖凝膠電泳步驟:1、用蒸餾水將制膠工具洗干凈,準(zhǔn)備好制膠平板,用瓊脂將模具邊緣封閉,架好梳子;2、根據(jù)要分離的樣品(DNA)大小配制合適濃度的瓊脂糖凝膠。準(zhǔn)確的稱(chēng)取一定量的瓊脂糖干粉,加入到合適體積的錐形瓶中,加入一定量的電泳緩沖液(30ml左右TAE);放入到微波爐內(nèi)加熱融化,冷卻片刻(不燙手即可)。
3、融化后的瓊脂溶液搖晃混勻,倒入電泳槽中,等其凝固;4、室溫下凝固30-40min左右,小心的拔出梳子,取出凝固好的凝膠放入電泳槽內(nèi),準(zhǔn)備上樣;5、在電泳槽中倒入電泳緩沖液(TAE);沒(méi)過(guò)膠面1mm左右,去除膠孔內(nèi)的氣泡。
6、上樣,5ulDNA樣品加入1ul上樣緩沖液(loading buffer)和1ul的染料,用搶混勻后加入到凝膠孔內(nèi);7、上樣結(jié)束,接通電源,紅色正極,黑色負(fù)極,DNA樣品有負(fù)極往正極運(yùn)動(dòng),加樣孔側(cè)為負(fù)40-50v電壓,電壓30敏左右即可(<40min);8、電壓結(jié)束,關(guān)閉電源,凝膠成像儀上觀察電壓位置并比對(duì)marker判斷大小。