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2022-12-04
保種！農(nóng)業(yè)農(nóng)村部印發(fā)“國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方
更新時間：2022-03-14 22:14:09作者：未知
為了貫通落實《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規(guī)劃》，切實加強我國地方豬遺傳資源保護，有效對付非洲豬瘟疫情的嚴重威脅，2019年6月22-23日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司組織地方豬遺傳材料采集保存工作相關(guān)科研工作者召開會議，通報《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》。云南農(nóng)業(yè)大學魏紅江教授受邀參加，并作了題為“家畜成纖維細胞制作和體細胞克隆技術(shù)在保種上的應(yīng)用”的學術(shù)報告。
會議通報《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》(農(nóng)種畜函[2019]14號)，擬采集制作61個國家級保種場、保護區(qū)內(nèi)國家級地方豬精液、體細胞等遺傳材料，并建成國家級地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫。云南農(nóng)業(yè)大學與江西農(nóng)業(yè)大學豬遺傳改良與養(yǎng)殖技術(shù)國家重點實驗室將協(xié)助全國畜牧總立制定遺傳材料采集技術(shù)規(guī)范，并進行技術(shù)指導。魏紅江教授的科研團隊發(fā)明性地把體細胞克隆技術(shù)應(yīng)用到了地方家畜品種的種質(zhì)資源保護上，曾凍存來自云南、內(nèi)蒙古、西藏等地區(qū)的家畜地方品種耳組織成纖維細胞，并通過對瀕于滅絕的生存于烏蒙山一帶的烏金豬黃毛系個體，利用體細胞克隆技術(shù)進行地方家畜品種的保存。目前，超細型絨山羊、烏金豬黃毛系、烏骨綿羊的克隆個體均已繁殖出后代。上述主意可服務(wù)于我國地方豬遺傳材料保存工作，為地方家畜品種種質(zhì)資源的保護與利用提供理論和技術(shù)支撐。
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司關(guān)于印發(fā)《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》的通知
農(nóng)種畜函〔2019〕14號
各省、自治區(qū)、直轄市農(nóng)業(yè)農(nóng)村(農(nóng)牧)、畜牧獸醫(yī)廳(委、局)，新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、黑龍江省農(nóng)墾總局，各有關(guān)單位:
為貫通落實《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規(guī)劃》，切實加強我國地方豬遺傳資源保護，有效對付非洲豬瘟疫情的嚴重威脅，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司決心開展國家級地方豬遺傳材料采集保存工作?，F(xiàn)將《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》印發(fā)你們，請按照方案請求，詳細抓好相關(guān)任務(wù)措施落實。如有不可抗力等有關(guān)情況，及時向我司畜禽種業(yè)處、全國畜牧總立反饋。
聯(lián)系人及電話：
種業(yè)管理司畜禽種業(yè)處 周曉鵬 010—59193287
全國畜牧總立畜禽資源處 張桂香 010—59194625
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司
2019年6月17日
國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案
為貫通落實《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規(guī)劃》，有效對付非洲豬瘟疫情對地方豬遺傳資源的嚴重威脅，加快國家級地方豬品種遺傳材料采集和保存，提高地方豬遺傳資源保護能力，維護地方豬遺傳資源的系統(tǒng)性和盡整性，制定本方案。
一、目的意義
我國地方豬遺傳資源具有抗逆性強、耐粗飼、繁殖率高、肉質(zhì)優(yōu)良等特性，利用地方豬遺傳材料開展育種工作，有利于提高生豬種業(yè)競爭力，發(fā)展特色畜牧業(yè)，滿意城鄉(xiāng)居民多樣化、高品質(zhì)消費需求。當前非洲豬瘟防控形勢重雜嚴重，對地方豬遺傳資源安全造成重要威脅。采用超低溫寒凍技術(shù)，采集保存我國地方豬品種的DNA、精液、體細胞及腸道菌群等遺傳材料，是對付非洲豬瘟疫情威脅，豐富地方豬品種保護手段，盡善家畜遺傳資源保種體系，推動生豬種業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的重要途徑。
二、主要任務(wù)
(一)采集制作遺傳材料
采集制作61個國家級保種場、保護區(qū)內(nèi)國家級地方豬精液、體細胞等遺傳材料(見附件1)。每個地方豬品種收集不少于120份耳組織樣(>2克/份);每個品種制作寒凍精液不少于15000劑(0.25mL細管)或者7500劑(0.5mL細管);每個品種制作體細胞系不少于222份(每份1mL)：每個品種收集不少于120份健康后備豬清新糞便樣品。
(二)構(gòu)建國家級地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫
在采集遺傳材料的同時，收集供體出生日期、三代以內(nèi)系譜信息、性能測定等表型記錄數(shù)據(jù)，構(gòu)建國家級地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫。
三、任務(wù)分工
(一)全國畜牧總立。具體組織項目實施，制定遺傳材料采集制作和驗收標準，在江西農(nóng)業(yè)大學、云南農(nóng)業(yè)大學等單位協(xié)助下開展技術(shù)培訓，進行督導檢查與驗收，集中保存遺傳材料，收集匯總記錄檔案。指導中國農(nóng)業(yè)大學構(gòu)建采集遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫，做好數(shù)據(jù)庫運行和維護等工作。
(二)保種場(保護區(qū))。協(xié)助開展遺傳材料采集和制作，和病毒、細菌檢測等工作，協(xié)助提供供體三代以內(nèi)系譜(需簽字蓋章)、生產(chǎn)性能測定等數(shù)據(jù)和正面、側(cè)面數(shù)碼照片各1張。
(三)遺傳材料制作單位。江西農(nóng)業(yè)大學、云南農(nóng)業(yè)大學等遺傳材料采集制作單位，與全國畜牧總立簽訂安全和保密允諾書，采集制作遺傳材料并開展病毒、細菌等檢測(見附件2、3)，提供檢測報告或者相關(guān)證明材料，填報相關(guān)數(shù)據(jù)(見附件4、5、6、7)，按期將制作產(chǎn)品輸送至國家級家畜基因庫保存。
江西農(nóng)業(yè)大學豬遺傳改良與養(yǎng)殖技術(shù)國家重點實驗室和云南農(nóng)業(yè)大學協(xié)助全國畜牧總立制定遺傳材料采集技術(shù)規(guī)范，進行技術(shù)指導，備份采集的遺傳材料，定期向全國畜牧總立書面匯報工作發(fā)展。
四、進度調(diào)度
1月至6月中旬：制定實施方案，明確參加遺傳材料采集單位的任務(wù)，與有關(guān)單位簽訂購買服務(wù)合同。
6月下旬：舉辦國家級地方豬遺傳材料采集制作培訓班，全面啟動相關(guān)工作。
6月下旬至12月：開展遺傳材料采集制作及入庫保存工作。對各制作單位收集制作遺傳材料進行質(zhì)量抽查。
12月底：各遺傳材料制作單位提交項目執(zhí)行情況等總結(jié)報告。
五、保障措施
(一)加強組織領(lǐng)導。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司盡職總體統(tǒng)籌協(xié)調(diào)，省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村主管部門踴躍協(xié)調(diào)配合本轄區(qū)內(nèi)工作。全國畜牧總立牽頭組織實施，省級畜牧技術(shù)推廣機構(gòu)、遺傳材料制作單位和國家級地方豬保種場(保護區(qū))、地縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門、各級種業(yè)管理系統(tǒng)等通力協(xié)作、密切配合，確保高效盡成工作。
(二)規(guī)范開展工作。加強對制作單位和保種場(保護區(qū))的培訓指導，強化項目參加人員、遺傳材料、數(shù)據(jù)信息等管理，保證遺傳材料質(zhì)量與生物安全。明確所收集遺傳材料的所有權(quán)、使用權(quán)等，相關(guān)專項成績等按照國家法律法規(guī)及相關(guān)規(guī)定實現(xiàn)共享。
(三)嚴厲經(jīng)費使用管理。承擔單位應(yīng)加強項目經(jīng)費管理，建立健全內(nèi)審機制，專款專用，明確經(jīng)費預算、使用范圍，嚴厲按照預算支出。項目組織實施單位會同地方主管部門，定期不定期對項目單位的資金使用情況、執(zhí)行進度等進行督導，保障項目規(guī)范有序?qū)嵤?/p>
附件：
1.任務(wù)分工表
2.國家級地方豬遺傳材料制作及質(zhì)量檢測方案
3.疫病檢測清單
4.遺傳材料采集供體登記表
5.精液采集和制作記錄表
6.體細胞制作記錄表
7.國家級家畜基因庫樣品采集記錄表
附件2
國家級地方豬遺傳材料制作及質(zhì)量檢測方案
一、精液寒凍保存
(一)數(shù)量請求
每個保種場(保護區(qū))的每個品種保存寒凍精液不少于15000劑(0.25mL細管)或7500劑(0.5mL細管)，公豬不少于6頭，涵蓋所有家系，每個個體保存寒凍精液不少于800劑(0.25mL)或400劑(0.5mL)。
(二)供體請求
符合品種特性、特征;三代以內(nèi)無血緣關(guān)系，系譜清晰;健康、必檢疾病為陰性。
(三)細管標記及包裝
應(yīng)在細管上標明保種場(保護區(qū))建設(shè)單位代碼、品種代碼、供體號和生產(chǎn)日期。保種場(保護區(qū))建設(shè)單位代碼用漢語拼音大寫首字母表示，品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母，生產(chǎn)日期按年月日次序羅列，年月日各占二位數(shù)字，年度的后兩位數(shù)組成年的二位數(shù)，月、日不夠二位的，月、日前分辭加“0”補充為二位數(shù)。
CQXK為重慶畜牧科學院代碼，RCZ為榮昌豬的品種代碼，11003為該公豬號，120525為2012年5月25日的生產(chǎn)日期。
細管裝入指形管，指形管上標記供體豬號、寒凍精液數(shù)量及生產(chǎn)日期。再用滅菌紗布袋將裝有寒凍精液的指形管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝一頭豬的寒凍精液，并有標簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標簽請求標記如下內(nèi)容：袋號、品種、供體豬號、寒凍精液數(shù)量、解凍后精子的活力。
(四)質(zhì)量檢測
1. 抽樣數(shù)量及請求
抽取總樣本量的2%進行質(zhì)量檢測，檢測合格率請求達到80%以上。
2. 指標
(1)0.25mL劑型寒凍精液
每支劑量≥0.18mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前進運動精子數(shù)≥2.5×107;每支細菌菌落數(shù)≤800個。
(2)0.5mL劑型寒凍精液
每支劑量≥0.40mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前進運動精子數(shù)≥5.0×107;每支細菌菌落數(shù)≤1600個。
二、體細胞寒凍保存
(一)數(shù)量請求
每個保種場(保護區(qū))的每個品種公豬不少于12頭，涵蓋所有家系;母豬不少于25頭，每個個體體外培育原代或第1代細胞6管，每管1mL，用1.5mL或2.0mL凍存管包裝，細胞密度為1×105/mL以上。
(二)供體請求
符合品種特性、特征;三代以內(nèi)無血緣關(guān)系，系譜清晰;健康、必檢疾病為陰性。
(三)寒凍管標記及包裝
凍存管上標記編號、品種漢語名稱或代碼，細胞名稱或代碼、性辭、培育代數(shù)、凍存日期。用滅菌紗布袋將凍存管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝2-3頭豬的凍存管，并有標簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標簽標伎捶種、供體豬號、凍存管數(shù)量。
(四)質(zhì)量檢測
1.抽樣數(shù)量。抽取總樣本量的4%進行質(zhì)量檢測，檢測合格率請求達到70%以上。
2.指標。細胞密度不低于1×105個/mL;細胞活力80%以上;支原體檢測為陰性。
三、耳組織及基因組DNA樣寒凍保存
每個保種場(保護區(qū))每個品種采樣數(shù)量40頭(對所有公豬家系所有進行采樣，繁殖公豬、繁殖母豬各1頭，和后備公豬和后備母豬各1頭，且后備豬避免全同胞關(guān)系)。每個品種每個個體采集3份耳樣，每份耳組織樣不少于2克(用2 ml凍存管保存)，凍存管上詳細標注品種、耳號、性辭、采樣日期、場地等關(guān)鍵信息。耳樣采集后立即置于液氮中保存。
四、腸道菌群寒凍保存
(一)數(shù)量請求
每個保種場(保護區(qū))每個品種公豬不少于10頭，母豬不少于50頭，每頭豬采集糞便樣本2份(每份2克)。
(二)供體請求
60日齡后備豬，符合品種特性、特征;三代以內(nèi)無血緣關(guān)系，系譜清晰;近一個月沒有使用抗生素、食欲正常、體重達該品種60日齡階段標準。
(三)凍存管標記及包裝
凍存管上標記編號、品種漢語名稱、性辭、采樣日齡、采樣日期。
(四)采樣請求和主意
1.采樣請求
(1)每頭豬采集清新糞便樣本2份(每份2克)，其中一份用2.0 mL凍存管包裝后立即投入液氮或-80℃保存，另一份用5.0mL凍存管取1克清新糞便置于3.0 mL 含20%甘油和5%蔗糖的保護液中，液氮或-80℃保存。
(2)采樣用凍存管請求無菌，配置的含20%甘油和5%蔗糖的保護液無菌。
(3)從肛門采集清新糞便樣品，采樣時每頭豬要更改新的手套，防止交織污染。
2.糞便樣品采集和保存主意
(1)采樣前準備。①2 mL和5 mL凍存管高壓滅菌(或直接購買無菌凍存管);②配置75%乙醇;③寒凍保護液配置：以配置100mL保護液為例：無菌生理鹽水中加入20 mL甘油和5g蔗糖，混勻、定容到100 mL。④液氮或干冰;⑤另外耗材：一次性手套、紙巾等。
(2)樣品采集。①固定采樣豬，用紙巾和75%乙醇擦洗肛門;②換上一次性手套，從肛門采集糞便樣品;③從采集的糞便頭中，取中間部分糞便2克裝入2 mL凍存管，擦拭潔凈凍存管，在管壁標記耳號、性辭、采樣如期和年齡，立即投入液氮中;④另取中間部分糞便1克裝入放有3 mL保護液的凍存管中，混勻，在管壁標記耳號、性辭、采樣如期和年齡，投入液氮中。⑤在液氮中保存，或送至實驗室后轉(zhuǎn)移到-80℃。⑥樣品運輸郵寄可用干冰。