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      1. 豬痢疾病原分離鑒定

        更新時間:2022-03-15 17:00:12作者:佚名

        豬痢疾病原分離鑒定

        1材料與方法: 1.1病料來源:2006年4月長春市郊區(qū)某大型養(yǎng)豬場送檢的疑似豬痢疾的病、死幼豬若干頭,已死亡豬只死亡時間未超過12h。 1.2抹片鏡檢:以病豬結(jié)腸黏膜刮取物或腸內(nèi)容物與適量生理鹽水混合后制成壓滴標(biāo)本片置于暗視野顯微鏡下(400倍)鏡檢。 1.3分離培養(yǎng):采用過濾培養(yǎng)法。用滅菌生理鹽水將病豬大腸黏液做5~10倍稀釋,輕度離心去沉渣,上清先用大孔徑濾膜逐級過濾,濾液再經(jīng)0.45μm濾膜過濾兩次。取濾液直接涂布接種于TSB鮮血瓊脂平板上,同時在培養(yǎng)基中加入壯觀霉素和萬古霉素各200μg,37℃~38℃嚴(yán)格厭氧培養(yǎng)3d,當(dāng)培養(yǎng)基上出現(xiàn)無菌落的β型溶血區(qū)時,挑取溶血區(qū)內(nèi)小塊瓊脂另做純培養(yǎng),每隔2d移植1次,共移植3次,對得到的純培養(yǎng)物做鏡檢。 1.4致病力鑒定試驗:采用動物感染試驗。購自長春生物制品所的2周齡豚鼠和3周齡昆明系小鼠各20只,各取10只灌服待檢菌的新鮮培養(yǎng)液,菌液濃度為5×108菌/mL,每次灌服1mL,另外的20只豚鼠和小鼠分別做對照試驗。 1.5藥敏試驗:藥敏試紙購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。將藥敏試紙放于瓊脂平板上37℃~38℃嚴(yán)格厭氧培養(yǎng)48h,結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗操作標(biāo)準(zhǔn)(第四版)》進(jìn)行。 2結(jié)果: 2.1病豬及病死豬病理剖檢變化:病死豬極度消瘦,被毛為糞便污染。病變主要在結(jié)腸和盲腸,回盲瓣存在明顯分界。急性型病豬的大腸壁和腸系膜充血、水腫,淋巴濾泡增大,腸黏膜腫脹并附有黏液、血塊和纖維性滲出物。慢性型病豬可見大腸黏膜呈出血性纖維素性炎癥,黏膜表層壞死,形成黏液纖維蛋白性假膜,外觀呈麩皮樣或豆腐渣樣。其他臟器無明顯變化。組織學(xué)觀察可見大腸黏膜層有炎癥反應(yīng),在腸腔表面和腺窩內(nèi)可見到數(shù)量不一的豬痢疾蛇形螺旋體。 2.2抹片鏡檢:暗視野顯微鏡下觀察可見大量活菌體,呈蛇樣活潑運(yùn)動。菌體長約6~8μm,有3~5個疏卷曲,兩端尖銳,形似雙燕翅狀。 2.3分離培養(yǎng):被檢樣品在TSB培養(yǎng)基上培養(yǎng)2d后,在培養(yǎng)基上形成扁平、半透明、針尖狀、強(qiáng)β型溶血性菌落,其純培養(yǎng)菌落抹片鏡檢所見結(jié)果同2.2。 2.4致病力鑒定試驗:灌服菌液3周內(nèi),大約一半的豚鼠和小鼠發(fā)生下痢和腸道疾病,而對照組動物未見發(fā)病。 2.5藥敏試驗:此次分離的菌株對痢菌凈、丁胺卡那霉素、桿菌肽敏感;對慶大霉素、諾氟沙星、氯霉素、鏈霉素、四環(huán)素等稍敏感;對青霉素、環(huán)丙沙星、氨芐西林、土霉素、紅霉素等幾乎不敏感。 3討論 近年來,在豬養(yǎng)殖過程中,為了防控一些細(xì)菌感染,在飼料添加劑及治療中盲目使用一些抗菌藥物,導(dǎo)致耐藥菌株越來越多并日趨嚴(yán)重。發(fā)生該病時,有條件的應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果,選擇敏感藥物進(jìn)行治療,且應(yīng)注意交替用藥,按療程投藥,這樣才能收到較好的治療效果。本病目前尚無疫苗可供預(yù)防,藥物治療雖可控制豬群的發(fā)病率、減少死亡,但停藥后極易復(fù)發(fā),在豬群中較難根除,只有采取綜合性預(yù)防措施并配合藥物防治才能有效地控制或消滅該病。(1)禁止從疫區(qū)引進(jìn)種豬,必須引進(jìn)時應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格檢疫,并至少隔離觀察1個月。(2)對無病豬群應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和清潔衛(wèi)生,實行“全進(jìn)全出”的育肥制度;發(fā)病豬數(shù)量多、流行面廣且難以全群淘汰時,對豬群采用藥物治療,并結(jié)合(過氧乙酸、新潔爾滅、NaOH溶液等消毒)、隔離、合理處理糞尿等措施,可有效降低豬群的發(fā)病率。
        本文標(biāo)簽: 痢疾  病原  分離  鑒定  材料  方法  1.1  病料  來源  

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